【學術前沿】STORM成像在腎小球基底膜研究中的應用—力顯智能INVIEW研究分享
慢性腎臟疾病影響著世界上10%以上的人口,其中大多數源于腎小球的損傷。腎小球過濾屏障(GFB)是一種能夠在血流和尿液之間選擇性滲透的復雜結構。 作為GFB組成部分之一的腎小球基底膜(GBM),是腎小球超濾的重要介質,它由內皮細胞和其兩側足細胞分泌的細胞外基質(ECM)蛋白組成。 一旦GFB中的任何組成部分出現損傷或遺傳缺陷都將會導致腎小球過濾屏障功能障礙,從而使得尿液中蛋白質含量升高引發腎臟疾病。
慢性腎臟疾病影響著世界上10%以上的人口,其中大多數源于腎小球的損傷。腎小球過濾屏障(GFB)是一種能夠在血流和尿液之間選擇性滲透的復雜結構。 作為GFB組成部分之一的腎小球基底膜(GBM),是腎小球超濾的重要介質,它由內皮細胞和其兩側足細胞分泌的細胞外基質(ECM)蛋白組成。 一旦GFB中的任何組成部分出現損傷或遺傳缺陷都將會導致腎小球過濾屏障功能障礙,從而使得尿液中蛋白質含量升高引發腎臟疾病。
隨著技術的進步,遠場熒光顯微技術在圖像分辨率中取得了重大進展,在兩個橫向維度上實現了20- 30nm的近分子分辨率。然而,三維(3D)納米分辨率成像仍然是一個挑戰。 在這里,作者通過使用光學散光以納米精度確定單個熒光團的軸向和橫向位置來演示3D隨機光學重構顯微鏡 (STORM)。光可切換探針的迭代、隨機激活可實現每個探針的高精度3D定位,因此無需掃描樣本即可構建3D圖像。使用這種方法,作者在橫向尺寸上實現了20-30 nm的圖像分辨率,在軸向尺寸上實現了 50-60 nm的圖像分辨率。這一發展使
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單個細胞內大量的相同結構有助于提高超分辨率圖像的定位精度并實現多維重建。使用隨機光學重建顯微鏡 (STORM) 和計算平均,作者估計了 30 多個表位標簽的徑向和軸向位置,這些表位標簽與睫狀體 TZ 的七個成分、IFT 粒子的九個成分、BBSome 的三個成分和一個直系同源物融合在一起。 總之,作者生成了一個全面的 3D 模型,分辨率為 15-30 nm,顯示了幾個 TZ、IFT 和 BBS 蛋白質在這種情況下導致的 IFT 復合體的結構變化和纖毛運輸的損傷。
在本研究中,研究者主要借助STORM超分辨率顯微鏡來研究大腸桿菌表面蛋白,目前在國內,隨機光學重建顯微鏡STORM已成功實現商用,有需要STORM成像技術進行實驗研究的專家老師們,請文末填寫問卷,即可預約獲得 iSTORM 超高分辨率顯微成像系統試拍服務~
哺乳動物的DNA復制是在許多復制起點開始的,這些復制起點聚集在整個基因組的數千個復制域(RD)中。然而,目前尚不清楚每個RD內的復制起源是隨機激活還是優先在某些染色質特征附近激活。
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